[صفحه اصلی ]   [Archive] [ English ]  
:: صفحه اصلي :: درباره نشريه :: آخرين شماره :: تمام شماره‌ها :: جستجو :: ثبت نام :: ارسال مقاله :: تماس با ما ::
:: دوره 12، شماره 4 - ( زمستان 1391 ) ::
جلد 12 شماره 4 صفحات 408-417 برگشت به فهرست نسخه ها
کلون، بیان و تخلیص پروتئین P647-153هموفیلوس آنفلوانزا
فرشاد نجومی، اشرف محبتی مبارز، علی هاتف سلمانیان، سید داور سیادت، نیما خرم آبادی، هانیه آقابابا
چکیده:   (3935 مشاهده)

  زمینه و هدف: همـوفیلوس آنفلوانزا، باسیل گرم منفی است که بخشی از میکروفلور نازوفارنکس را در اغلب افراد تشکیل داده و سویه های مختلف آن در دو گروه کپسولدار (قابل طبقه بندی) و بدون کپسول (غیرقابل طبقه بندی) مورد مطالعه قرار می­گیرد. پروتئین غشاء خارجی P6 ، نوعی ایمونوژن حفاظت شده و پایدار درمیان سویه­های فاقد کپسول و نیز سویه‏های کپسولدار هموفیلوس آنفلوانزا می­باشد و خود بعنوان کاندید مناسبی جهت واکسیناسیون علیه هموفیلوس آنفلوانزا مطرح گردیده است. هدف از این مطالعه، تولید و تخلیص آنتی­ژن نوترکیب P6 به عنوان یک پروتئین حامل در واکسنهای کونژوگه می­باشد.

  روش کار: قطعه­ای به طول324 جفت باز از بخش انتهای ژن کد کننده پروتئین P6 در حامل پلاسمیدی pJET1.2 و متعاقبا در pET28a(+) کلون شد. القای تولید پروتئین با یک میلی مولار IPTG صورت گرفت و تخلیص آن با حل کردن اجسام سلولی در اوره، جذب با رزین نیکل، حذف اوره با شیب کاهشی اوره در محلول های شستشو و نهایتا جمع آوری پروتئین نوترکیب به شکل محلول در ایمیدازول انجام شد. حذف ایمیدازول با دیالیز در برابر بافرفسفات نمکی صورت پذیرفت. پروتئین نوترکیب P647-153 با استفاده از آنتی سرم پلی کلونال خرگوشی ضد هموفیلوس آنفلوانزا با استفاده از روش وسترن بلات تایید گردید.

  یافته ها: پروتئین نوترکیب P647-153 در میزبان E. coli BL21(DE3) با موفقیت بیان و تخلیص گردید (حدود 4 میلی گرم درهر لیتر کشت مایع LB ). ساختار آنتی­ژنی پروتئین نوترکیب P6 نیز با استفاده از ایمونوبلاتینگ تأیید شد.

  نتیجه گیری: نتایج وسترن بلات به موازات نتایج تعیین توالی، حاکی ازصحت تولید پروتئین P647-153 نوترکیب و حفظ نسبی ساختار اپی ‌ توپی آن می­باشد.

واژه‌های کلیدی: هموفیلوس آنفلوانزا؛ کلون و بیان؛ P647-153
متن کامل [PDF 363 kb]   (2677 دریافت)    
نوع مطالعه: مقاله اصیل | موضوع مقاله: تخصصي
دریافت: ۱۳۹۰/۷/۱۵ | پذیرش: ۱۳۹۰/۱۱/۱۰ | انتشار: ۱۳۹۱/۱۰/۱
ارسال پیام به نویسنده مسئول

ارسال نظر درباره این مقاله
نام کاربری یا پست الکترونیک شما:

CAPTCHA


XML   English Abstract   Print


Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:

Nojoomi F, Mohabati Mobarez A, Salmanian A H, Siadat S D, Khoramabadi N, Aghababa H. Cloning, Expression and Purification of P647-153 of Haemophilus influenzae. J Ardabil Univ Med Sci. 2012; 12 (4) :408-417
URL: http://jarums.arums.ac.ir/article-1-77-fa.html

نجومی فرشاد، محبتی مبارز اشرف، سلمانیان علی هاتف، سیادت سید داور، خرم آبادی نیما، آقابابا هانیه. کلون، بیان و تخلیص پروتئین P647-153هموفیلوس آنفلوانزا. مجله دانشگاه علوم پزشکی اردبیل. 1391; 12 (4) :408-417

URL: http://jarums.arums.ac.ir/article-1-77-fa.html



دوره 12، شماره 4 - ( زمستان 1391 ) برگشت به فهرست نسخه ها
مجله دانشگاه علوم پزشکی اردبیل Journal of Ardabil University of Medical Sciences
Persian site map - English site map - Created in 0.11 seconds with 32 queries by YEKTAWEB 3925